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ddH2和生理鹽水
鏈霉親和素能在高溫、極端pH和存在變性劑的條件下保持生物活性,是自然界中最穩(wěn)定的蛋白質(zhì)之一。
是的,重組鏈霉親和素在大腸桿菌中表達(dá),經(jīng)過嚴(yán)格的純化和質(zhì)控過程,確保產(chǎn)品的安全性和高效性。
蛋白A的優(yōu)勢在于其高流速和強結(jié)合能力,適合大規(guī)??贵w純化。局限性包括非特異性結(jié)合和在特定條件下的穩(wěn)定性問題。
通過重組表達(dá)去除N端白蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域后,蛋白G的血清蛋白結(jié)合水平降低,從而減少了非特異性結(jié)合,提高了純化效率。
蛋白L適用于抗體片段的純化以及那些不能被蛋白A和G有效結(jié)合的抗體亞型,如一些人源kappa輕鏈抗體。
主要區(qū)別在于PAM識別和切割末端。As Cas12a識別5'-TTTV PAM序列并產(chǎn)生交錯末端,而Cas9識別5'-NGG PAM序列并產(chǎn)生平末端。交錯末端在某些應(yīng)用中更有利于DNA序列的精確方向整合。
As Cas12a(Cpf1)與crRNA形成的核糖核蛋白(RNP)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中,更安全、快速,脫靶效應(yīng)低,編輯效率高,逐漸成為CRISPR基因編輯的有效方式。
推薦將As Cas12a(Cpf1)核酸酶與Cas12a crRNA以等摩爾量結(jié)合。C末端帶有SV40 NLS和nucleoplasmin NLS兩個核定位信號,以及TEV蛋白酶切位點和6xHis標(biāo)簽,以確保最佳編輯效果。
人源基因敲除質(zhì)粒是一種用于基因編輯技術(shù)的載體,通過構(gòu)建并轉(zhuǎn)染細(xì)胞,可以模擬特定基因的缺失或突變,從而研究該基因在疾病發(fā)生中的作用。
所有sgRNA文庫細(xì)胞pool構(gòu)建完成后都會通過NGS檢測覆蓋度,保證產(chǎn)品質(zhì)量。